检测原理:
在一定条件下,磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用,其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常条件下,胆碱酯酶(ChE)催化神经传导代谢产物类似物(碘化硫代乙酰胆碱ATCL或碘化硫代丁酰胆碱BTCI)水解,其水解产物与显色剂(二硫代二硝基苯甲酸DTNB)发生反应,产生黄色物质。
检测标准:
国家标准方法GB/T 5009.199-2003
农业部标准:NYT448—2001。
产品规格:
150份/盒 300份/盒 500份/盒
行业标准:500样/盒(适用于国内所有农药残留速测仪和分光光度检测仪。
检测灵敏度:
使用农药标准液对农残速测试剂的检测限进行多次测试,通过了农业部质量监督检验测试中心等专业检验机构的检测验证,结果符合国家标准,具体请参照检测报告。
农药残留速测试剂酶抑制率法对部分农药的检出限:
农药中文名称 英文通用名称 检出限(mg/kg) 残留限量
灭多威 Thiodicarb 0.8 不得检出
氧化乐果 Omethoate 0.4 不得检出
对硫磷 Parathion 0.8 不得检出
甲基异柳磷 isofenphos-methyl 2.0 不得检出
辛硫磷 Phoxim 0.2 不得检出
甲胺磷 Methamidophos 0.3 不得检出
敌敌畏 Dichlorovos 0.1 0.2
丁硫克百威 carbosulfan 0.2 不得检出
马拉硫磷 malathion 0.5 不得检出
敌百虫 Trichlophon 0.1 0.1
呋喃丹 Furadan 0.1 不得检出
乐果 Dimethoate 0.8 1.0试剂配制:
缓冲剂 6包 每包加510mL蒸馏水或纯净水溶解,常温存放。
显色剂 3瓶 每瓶加10.5mL缓冲液溶解,4℃冰箱保存,每份加100μL。
底 物 10瓶 每瓶加3.1mL蒸馏水或纯净水溶解,4℃冰箱保存,每份加100μL。
胆碱酯酶 10瓶 不用配制,直接取用 4℃冰箱保存,每份加100μL。
酶活力 空白对照1分钟吸光度变化值(ΔΑ0)在0.15-0.3之间。
检测步骤:
1、提前30分钟打开久华食安农药残留检测仪LS-SC-8预热稳定机器.
2、取缓冲溶液试剂1袋,加入500mL蒸馏水或纯净水,溶解搅拌均匀,既得pH8.0缓冲溶液,密闭、避光、阴凉处保存。
3、农药残留速测试剂的配置:在胆碱酯酶瓶中加入缓冲溶液3.0mL、底物瓶中加入蒸馏水15.0mL、显色剂瓶中加入缓冲溶液15.0mL,轻摇食指完全溶解。注意不要剧烈振摇胆碱酯酶液。
4、取2g果蔬样品(块茎类取4g)剪成1cm左右见方碎片,放入小烧杯(或取样瓶)中;
5、加入20mL缓冲液,振荡1~2min,倒出提取液,静置2min待测。
3、对照测试:于反应瓶中加入3mL缓冲液,再分别加入50μL显色剂和酶液,混匀,37℃下放置30 min后加入50μL底物,摇匀并立即倒入比色杯中,放入测试通道,按仪器“对照”键测试3min的吸光度变化值ΔΑ0 .。
6、样品测试:于反应瓶中加入3mL待测样品液,再分别加入50μL显色剂和酶液,混匀,37℃下放置30 min后加入50μL底物,摇匀并立即倒入比色杯中,放入测试通道,按仪器“样品”键,测试3min的吸光度变化值ΔΑt .。
结果判定:
以分光光度计测试时,按以下表达式计算出抑制率:
抑制率(%)=[(ΔΑ0-ΔΑt )/ΔΑ0]×100
以农残检测仪检测时其抑制率一般可自动计算。若样品抑制率≥70%,表示被测果蔬农残超标,为阳性结果。阳性结果的样品需做2次以上重复检测,多次检测仍呈阳性需用气相色谱等仪器做进一步确认。
操作提示:在加底物的环节中,可预先将底物加入比色杯,待静置时间一到,马上将反应瓶中的反应液倒入已经加有底物的比色杯,并迅速放入测试通道进行测试。这样可以减少同时检测多个样品时因加底物时间过长而造成的误差。
注意事项:
酶活性要求:本试剂盒中酶试剂正常活性ΔA0=0.4~0.8,符合NY/T 448-2001方法的要求。
为保证酶活性,未开封试剂应尽 量使用冷冻柜保存,开封试剂应尽量使用4℃冷鲜柜保存。
使用:任何试剂使用时,用一瓶打开一瓶,用完后才使用新的,防止变质。
器具原则:任何用于移液的器具和容器都应各自贴上标签,单独使用,以免交叉污染。
试剂只出不入原则:测试时,从任何试剂瓶吸出的试剂,禁止再次注射回试剂瓶。
环境温度对测试的影响:当环境温度过低时(一般低于20℃),测试时需作必要保温措施
保存条件:
1、农药残留速测试剂稳定性较好,可以常温运输或邮寄,长期存放应在4℃冰箱中,保质期为12个月;
2、室温或常温保存时,保质期为3~6个月。
3、溶解前冷冻保存的保质期为1年;冷藏保存时间不建议过长。
4、酶粉溶解后尽快用完,可短期冷藏保存;如1星期内不能用完,应冷冻保存,但反复冻融不可超过3次,冷冻保存不超过1个月。
5、底物和显色剂溶解后需冷藏保存,保质期一个月,可冷冻长期保存。